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液相色譜方法開發(fā)中紫外吸收波長的選擇

更新時間:2022-12-12 點(diǎn)擊次數(shù):3497
 液相色譜方法開發(fā)過程中,樣品的紫外吸收波長對開發(fā)結(jié)果具有舉足輕重的影響。對于許多樣品而言,只有仔細(xì)選擇合適的檢測波長,才能得到良好的分離效果。選擇波長時需了解各樣品組分的UV光譜,若能取得被測物的標(biāo)準(zhǔn)品,可較快獲得各樣品組分的UV圖譜,應(yīng)用DAD還可獲得大量的其他補(bǔ)充信息。

選擇吸收波長一般包含(不限于)

以下幾種考慮

1、不光考慮目標(biāo)物的最大吸收波長,同時要考慮樣品干擾物吸收值最小的波長。

2、飽和烴類以及其氨基或氰基衍生物是僅有的一類wan全不適合UV檢測的有機(jī)化合物。

3、被特定基團(tuán)(-O-、-OH、-Cl、-COOH、-COOR)取代的飽和烴類具有臨界吸收值,可能需在短波長處(185-210nm)檢測。

4、除上述幾類化合物外,一般化合物都能在較長波長(>210nm)檢測。下表列出各種官能團(tuán)的最大波長與摩爾吸收系數(shù)。

一些常用官能團(tuán)的最大吸收波長與摩爾吸收系數(shù)

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5、流動相組分的紫外本底吸收。此項(xiàng)考慮涉及到溶劑的種類選擇、流動相pH選擇以及流動相緩沖鹽選擇等。有些酸有紫外本底,如甲酸,乙酸;有些沒有,如磷酸。這樣,在使用較低波長檢測的方法時,就要考慮使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波長檢測下應(yīng)該慎用。水在180nm以上實(shí)際無吸收,可忽略其影響。正相色譜所用溶劑的吸收度通常更強(qiáng),所以一般需在長波長檢測。

反相流動相組分的UV吸收值與波長的關(guān)系

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正相溶劑的UV吸收值與波長的關(guān)系

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6、最大吸收波長λmax與化學(xué)結(jié)構(gòu)的關(guān)系。紫外光譜提供了分子中生色團(tuán)和助色團(tuán)的信息,目前雖不能精確計(jì)算紫外特征吸收峰,但已總結(jié)出各種經(jīng)驗(yàn)規(guī)則。最早提出的Woodward(伍德沃德)和Fieser(費(fèi)塞爾)規(guī)則可用來估算二烯烴,多烯烴及共軛烯酮類化合物的最大紫外吸收波長。

多烯烴類與α,β-不飽和酮類紫外吸收的經(jīng)驗(yàn)規(guī)則

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參考資料:

1. 實(shí)用高效液相色譜法的建立[美]L.R.森德爾 J.J.柯克蘭 J.L.格萊吉克 著.張玉奎 王杰 張維冰 譯.

 

2. 基礎(chǔ)有機(jī)化學(xué)(第三版).刑其毅 裴偉偉 徐瑞秋 裴堅(jiān).

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